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斑马鱼肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒
斑马鱼肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中斑马鱼肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量
斑马鱼肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中斑马鱼肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量
l 有效期：6个月
l 保存条件：2-8℃
l 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被斑马鱼肿瘤坏死因子α（TNF-α）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的斑马鱼肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20
分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS
(0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成
|
名称 |
96孔配置 |
48孔配置 |
备注 |
|
微孔酶标板 |
12孔×8条 |
12孔×4条 |
无 |
|
标准品 |
0.3mL*6管 |
0.3mL*6管 |
无 |
|
样本稀释液 |
6mL |
3mL |
无 |
|
检测抗体-HRP |
10mL |
5mL |
无 |
|
20×洗涤缓冲液 |
25mL |
15mL |
按说明书进行稀释 |
|
底物A |
6mL |
3mL |
无 |
|
底物B |
6mL |
3mL |
无 |
|
终止液 |
6mL |
3mL |
无 |
|
封板膜 |
2张 |
2张 |
无 |
|
说明书 |
1份 |
1份 |
无 |
|
自封袋 |
1个 |
1个 |
无 |
备注：
1. 标准品浓度依次为：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
