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关于酶联免疫法几个注意点

文字:[大][中][小] 手机页面二维码 2020/11/16     浏览次数:    

目前酶联免疫法检测用试剂盒种类繁多,在实际检测中发现,一般在试剂盒说明书中列出以下指标:检测限;回收率;交叉反应率;标准曲线图谱及数据,标准曲线至少由5个浓度组成;IC50测定值及变形曲线点数目的是比较规范的试剂盒,可以选择。

 

临界值(cut-off)的确定

在实际使用酶联免疫法检测时要首先确定临界值。通过检测结果与临界值的比较,可判定样品为阴性或可疑。对于禁用药物,检测方法的临界值为定量限,即现有的公认的仪器检测所能达到的*定量限。对于有*残留限量(MRL)的药物,检测方法的临界值为20份添加MRL浓度的样品重复3次测定的均值减去164倍标准差。检测结果如小于临界值为阴性,大于或等于临界值或标准规定为可疑,需要用确证法确证。

 


检测限的测定 可添加MRLMRL上下各一个浓度。

每个试验室在使用酶联免疫法检测时,应做一下各自试验室的检测限。检测限为20份空白样品测定的均值加3倍标准差。如果经规范操作后所得检测限大于临界值时,说明试剂盒背景干扰大,试剂盒灵敏度不能满足检测要求,应与试剂盒厂家联系或弃去不用选用另外的试剂盒。

 


酶联免疫检测方法验证

在使用酶联免疫法检测样品时,应对方法进行验证。主要测定以下内容:

标准曲线的测定,标准曲线至少由5个浓度组成,测定次数不少于5次,以确定工作浓度范围和IC50范围。一般临界值为IC50附近,检测灵敏度高。

样品检测限的测定。

样品添加回收实验。对禁用药物可添加定量限和2倍定量限,对于有*残留限量(MRL)的药物,可添加MRLMRL上下各一个浓度。

 

准确度:若回收率大于40%符合相应检测标准的要求。精密度:批内变异系数每批平行样之间的变异系数小于或等于25%,对于禁用药物小于或等于30%。批间变异系数所有样品间变异系数小于或等于30%,对于禁用药物小于或等于40%。满足以上准确度和精密度要求,说明酶联免疫方法可行,可用来检测药物残留。

 


其他

对于可用于多残留检测的试剂盒,以交叉反应率低的药物做阳性添加测定临界值(cut-off)

实际检测样品时要包括以下实验:至少做两条标准曲线,两个阴性对照品,两个添加临界值(cut-off)的阳性对照品,两个平行的待检样品。检测结果出来后通过标准曲线形状(符合检测要求为S)IC50与临界值是否相近及阳性样品回收率,样品平行情况可确定检测是否可信

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