苹果酸脱氢酶（MDH）ELISA 测试盒

本试剂盒可测动物血清、培养液等相关液体样本中 MDH 活性

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一、实验仪器：

试管、微量移液器、旋涡混匀器、37°C 恒温水浴锅，紫外分光光度计（340nm）

二、适用范围：

本试剂盒可测动物血清、培养液等相关液体样本中 MDH 活性三、测定意义：

MDH 与植物代谢的多条重要途径有密切关系，它在运转物质和能量的 Mal/OAA（苹果酸/草酰乙酸）和 Mal/Asp（苹果酸/天冬氨酸）穿梭中起重要作用；在光呼吸中，MDH 为 Gly（甘氨酸）氧化提供 NAD+；在线粒体中，MDH 还是决定 TCA(三羧酸循环)运转速度的调节酶之一；在细胞溶质中， MDH 与丙酮酸支路相联系。所以 MDH 系统不仅是研究酶区域化和酶调节的好系统，也为研究各细胞器之间的联系和许多发育问题提供了方便。

四、操作步骤：

a、将紫外分光光度计于 340nm 处,0.5cm 光径石英比色皿,以双蒸水调零 (石英比色皿准备两只,

一只用于调零,一只用于测定)。

b、将工作液，37℃预温 3 分钟以上。

c、往相应编号的试管中加入 50μl 待测样本，取 1ml 工作液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。

(空白管取 50μl 双蒸水,加入 1ml 工作液,其它操作与测定相同)

d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度计 340nm处比色，20 秒时读取吸光度值（A 1值）,在 1

分 20 秒时再次测定吸光度值（A2 值）；

e、求出 2 次吸光度差值（△A=A1 -A2 ）。

[注]：空白管只须做 1～2 只 (空白 OD 很稳定)

若△A 测定/分＜0.05 则需加大样本的浓度；否则影响检测结果。

若△A测定/分＞0.3，则需将样本的浓度稀释后再测；否则影响检测结果。

请在批量检测前一定要取正常对照组样本做此样本最佳浓度的预试。

五、计算公式：

MDH活力 =  测定 A－空白 A    × 反应液总体积(1.05ml) × 样本测试前 ÷ 待测样本蛋白浓度

（U / mgprot） 6.2*×比色光径(0.5cm)    取样量(0.05ml)         稀释系数        （mgprot / ml）

* 6.2 ：底物的微摩尔消光系数

测定管△A：20 秒时测定管的吸光度 OD 减去 1 分 20 秒时的测定管吸光度 OD；

空白管△A：20 秒时空白管的吸光度 OD 减去 1 分 20 秒时的空白管吸光度 OD。